水稻成熟種子直鏈淀粉含量的測定實驗

水稻成熟種子中直鏈淀粉含量（AC）的測定
1.1 樣品前處理

       以株為單位混收部分種子。從每一單株上所結的成熟種子中選取 50 粒左右，一部分用于測定糊化溫度，一部分合后磨成精米粉，按部頒標準 NY147-88 所示方法用于直鏈淀粉分析儀測定直鏈淀粉含量。
1.2 大量測定
      種子成熟后，按單株收獲。直鏈淀粉含量的測定按農業部部頒標準 NY147-88進行。在萬分之一天平上準確稱取 50mg 干精米粉，裝入 50ml 帶刻度試管中；然后在試管中加入 0.5ml 無水乙醇，輕搖試管使樣品濕潤分散, 再加入 4.5ml 1.0mol/l的 NaOH 溶液，混勻；將試管置沸水浴中煮 20min，冷卻至室溫后用蒸餾水定容至刻度，充分混勻；吸取 5ml 消化液，加入已盛有 20ml 左右蒸餾水的 100ml 容量瓶中；加入 1.0ml 1.0mol/l 的乙酸溶液，使樣品酸化；加入 1.5ml 0.02% 的碘液，用蒸餾水定容至刻度，搖勻后放置 15 min；在分光光度計上于 620nm 波長下用 1cm比色杯測定光密度值；最后以標準樣品測得的光密度值及其相應的直鏈淀粉含量制作標準曲線，并根據此計算待測樣品的直鏈淀粉含量。每一樣品做 2 重復。
1.3 單粒測定
       取精米研磨成粉并過 100 目篩，再烘干。準確稱取 5～10mg 干精米粉，裝入50ml 帶刻度試管中；然后在試管中加入 0.2ml 無水乙醇，輕搖試管使樣品濕潤分散, 再加入 0.9ml 1.0mol/l 的 NaOH 溶液，混勻；將試管置沸水浴中煮 20min，冷卻至室溫后用蒸餾水定溶至刻度，充分混勻；吸取 25ml 消化液，加入已盛有 20ml左右蒸餾水的 100ml 容量瓶中；加入 1.0ml 1.0mol/l 的乙酸溶液，使樣品酸化；加入 1.5ml 0.02% 的碘液，用蒸餾水定容至刻度，搖勻后放置 15 min；在分光光度計上于 620nm 波長下用 1cm 比色杯測定光密度值；最后以標準樣品測得的光密22度值及其相應的直鏈淀粉含量制作標準曲線，并根據此計算待測樣品的直鏈淀粉含量。
水稻成熟種子中膠稠度和糊化溫度的測定
         以株為單位混收部分種子。從每一單株上所結的成熟種子中選取 50 粒左右，一部分用于測定糊化溫度，一部分混合后磨成精米粉，按部頒標準 NY147-88 所示方法用于測定直鏈淀粉含量和膠稠度。
2.1水稻成熟種子淀粉粘滯性譜（RVA）分析采用澳大利亞Newport Scientific 儀器公司生產的3-D型RVA儀進行快速測定，用 TCW（thermal cycle for windows）配套軟件進行分析。根據操作規程，含水量為14.0%時，樣品量為 3.00g，蒸餾水 25.0ml。在攪拌過程中，罐內溫度變化如下：50℃下保持1min；以12℃/ min的速度上升到95℃（3.75min）；95℃下保持2.5 min；以 12℃/ min 下降到 50℃（3.75min）；50℃下保持 1.4min。攪拌器在起始 10s 內轉動速度為 960r/min，之后保持在 160r/min。粘滯性值用 RVU（RVA 粘度單位）表示。RVA 譜特征除用峰值粘度（peak viscosity）、熱漿粘度（hot viscosity）和冷膠粘度（cool viscosity）描述外，還用崩解值（breakdown, 峰值粘度-熱漿粘度）、消減值（setback, 冷膠粘度-峰值粘度）和回復值（consistence, 冷膠粘度-熱漿粘度）等來表示（AACC，1995）。
2.2 稻米籽粒掃描電鏡觀察成熟期選擇部分轉基因系及其對照，按單株選擇相同熟期的整個單穗，自然曬干。從各個單穗上取相似生長位置的強勢粒。于 Philips XL 30-ESEM（環鏡掃描電子顯微鏡）環掃下觀察籽粒橫向的自然斷裂面的淀粉充實情況。
2.3 田間性狀調查按完全隨機區組設計，種植轉基因純合體及未轉化對照，2 次重復，分小區種植，每行 15 株，每列 8 株。每個小區隨機取 10 株考察主要農藝性狀，考察內容包括：株高、穗長、單株分蘗數、結實率和千粒重，進行統計分析，比較轉基因純合體主要農藝性狀與未轉化對照的差異。

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