瘦肉精檢測方法——從現場快速篩查到實驗室確證

鹽酸克倫特羅(Clenbuterol)俗稱“瘦肉精”，屬于β-興奮劑，因為該藥可以提高瘦肉率，減少脂肪沉積和促進動物生長，被一些畜牧養殖企業作為養殖促進劑非法使用。人食用了飼喂克倫特羅作為添加劑的動物所產生的畜產品后，殘留的克倫特羅可導致人體肌肉震顫、心悸、神經過敏、頭痛、目眩、惡心、嘔吐、發燒、戰栗等癥狀，對消費者的健康造成極大危害。因此世界許多國家現已被明令禁止在飼料中添加克倫特羅來增加動物的瘦肉率。

　　我國農業部規定鹽酸克倫特羅在動物體內的殘留標準為：馬、牛肌肉0.1ug/kg、 肝、腎0.5ug/kg牛奶0.05ug/kg

　　1、 現場快速篩查產品

　　瘦肉精(鹽酸克倫特羅)膠體金檢測卡用于定性檢測動物尿液(例如豬尿、牛尿、羊尿等)中鹽酸克倫特羅殘留，整個檢測過程只需要5-10分鐘左右，靈敏度為3ng/ml(3ppb)�？焖俜奖�，適用于屠宰場、農貿市場、超市等現場快速檢測。

	訂貨號	產品名稱	規格	靈敏度
膠體金檢測卡	HQ09001	鹽酸克倫特羅(尿液)	50條/盒	3ppb
	HQ09001-1	鹽酸克倫特羅(組織)	50條/盒	1ppb

　　2、 快速檢測產品

　　瘦肉精（鹽酸克倫特羅）ELISA試劑盒使用酶聯免疫檢測試劑盒方法可檢測尿，肌肉，肝臟及飼料中的鹽酸克倫特羅。同時用于處理96個樣品，操作時間短于45min，靈敏度為0.025-0.1ng/m(ppb)。具有經濟、快速等優點�？蛇M行定性半定量，相對于膠體金檢測卡結果更準確，適用于實驗室快速檢測。

ELISA快速檢測試劑盒	訂貨號	產品名稱	規格	靈敏度
	HE09002	鹽酸克倫特羅	96孔	0.1ppb
	HE09002-1	鹽酸克倫特羅	96孔	0.05ppb
	HE09002-2	鹽酸克倫特羅	96孔	0.025ppb

　　3、準確定性定量產品

　　采用SPE-GC/MS或SPE-LC/MS等手段可對動物組織、尿液、肝臟、飼料、動物加工制品等中的鹽酸克倫特羅的進行準確定性定量，能提供確證數據報告。適用于實驗室確證實驗或出具法律依據報告。

　　

• 固相萃取柱：Cleanert PCX 150mg/6mL（P/N：CX1506）

• GC色譜柱：DA-5MS, 30m×0.25mm×0.25µm（P/N:1525-3002）

• 參考配置：12位SPE真空裝置（P/N: VM12）

　　檢測方法如下

　　1.實驗材料

　　1.1 固相萃取小柱：Cleanert PCX(150mg/6mL)P/N: CX1506

　　1.2 四種β-激動劑藥物：鹽酸克侖特羅、沙丁胺醇、西馬特羅、萊克多巴胺等4種β-激動劑藥物。

　　2. 試料的制備

　　準確稱取已絞碎的組織樣品10g，于50mL具塞離心管中。加入20mmol/L的乙酸銨緩沖溶液20mL，均質5min。加入50uL β-鹽酸葡萄糖醛甙酶溶液，搖勻、超聲15min，于37℃酶解18h。于3000r/min離心5min，過濾上清液，收集濾液。

　　3. 凈化

　　 依次用甲醇5mL、水5mL和30mmol/L鹽酸5mL潤洗固相萃取小柱，將上述備用液過柱，依次用水5mL、甲醇5mL淋洗，真空抽干，用4%氨化甲醇5mL洗脫PCX小柱，收集洗脫液于具塞玻璃試管中，50℃下氮氣吹干。在樣液過柱和洗脫過程中流速控制在1mL/min左右。

　　4. 衍生化及檢測

　　將上述盛有殘渣的具塞玻璃試管放入50℃烘箱中加熱片刻，除去水分后，加入甲苯100mL和雙三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）100mL，渦旋振蕩20s，密封玻璃塞，置于80℃恒溫烘箱中加熱1小時，冷卻后加入300mL甲苯，作為試樣溶液，供氣相色譜-質譜分析（色譜柱：DA-5MS, 30m×0.25mm×0.25µm，P/N:1525-3002）。

　　5. 結果

　　5.1 回收率實驗（精密度和準確度）

　　將豬肝空白樣品經過液液萃取初步處理后，分別添加一定量的標準溶液，配制1μg/L、2μg/L、5μg/L、10μg/L和100μg/L五個濃度的試樣溶液，每批次內同一濃度做5次平行實驗，共4個批次（樣品典型回收率色譜圖見附圖）。

　　豬肝中實驗結果列表如下：

添加濃度（μg/L）	回收濃度（μg/L）	平均回收值（μg/L）	平均回收率（%）	相對標準偏差（%）
1	0.75	0.72	72.40	5.93
	0.67
	0.72
	0.70
	0.78
2	1.62	1.63	81.30	1.23
	1.66
	1.60
	1.61
	1.64
5	4.02	4.24	84.80	4.16
	4.10
	4.27
	4.38
	4.43
10	8.24	8.45	84.45	2.81
	8.35
	8.77
	8.62
	8.25
100	90.24	9.12	91.15	2.86
	87.15
	91.77
	92.62
	93.95

　　5.2重復性實驗（批間誤差實驗）：

　　豬肝中實驗結果列表如下：

批間	添加濃度（μg/L）
	1		2		5		10		100
	平均回收率%	RSD%	平均回收率%	RSD%	平均回收率%	RSD%	平均回收率%	RSD%	平均回收率%	RSD%
1	72.40	5.93	81.30	3.49	84.80	6.16	84.45	3.59	91.15	2.86
2	75.37	6.12	80.47	5.37	84.74	7.55	87.46	4.68	90.05	3.86
3	70.09	7.85	80.80	6.57	83.10	8.17	83.21	5.39	89.53	4.16
4	76.73	4.90	78.50	8.35	82.90	5.11	85.95	5.72	88.27	5.93
平均值	73.65	6.20	80.25	5.95	83.88	6.75	85.27	4.84	89.75	4.20
RSD%	12.95		10.79		9.43		7.00		5.75

　　附圖：豬肝中0.5μg/L、1μg/L、2μg/L、5μg/L、10μg/L和100μg/L六個濃度檢測結果總離子流圖（TIC）代表圖譜：

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