玉米葉綠素含量的快速測(cè)定

      葉綠素是植物葉片光合作用的主要光合色素，必不可少。葉綠素含量的測(cè)定是實(shí)驗(yàn)室的重要項(xiàng)目之一，如采用化學(xué)方法Arnon法，分光光度計(jì)法，葉綠素含量測(cè)定儀等，不一而足。迄今為止，在實(shí)際應(yīng)用中，我們通常采用葉綠素含量測(cè)定儀，因?yàn)槠浞奖憧旖荩�而且精確度高，方便攜帶。受到廣泛農(nóng)業(yè)工作者、科研院所的青睞。
      分光光度計(jì)法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，但是在測(cè)定時(shí)需要損傷葉片和組織，不利于對(duì)植株的系統(tǒng)研究。葉色值反映了植物葉片的綠色程度，與葉綠素含量存在一定的相關(guān)性。葉綠素含量測(cè)定儀是一種專門用于測(cè)定植物葉綠素含量的儀器，該儀器有多家廠商生產(chǎn)銷售，其中以日本柯尼卡美能達(dá)公司的SPAD-502最為高端和暢銷。托普儀器作為日本柯尼卡美能達(dá)公司的特約一級(jí)代理商，也提供葉綠素含量測(cè)定儀的銷售工作。葉綠素測(cè)量?jī)x的測(cè)定原理是：測(cè)量葉子在紅色區(qū)域和近紅外區(qū)域的吸收率。通過這兩部分區(qū)域的吸收率，來計(jì)算出一種SPAD值，它是用數(shù)字來表示目前和葉子中葉綠素含量相對(duì)應(yīng)的參數(shù)。因?yàn)槿~綠素在藍(lán)色區(qū)域（400—500nm）和紅色區(qū)域（600—700nm）范圍內(nèi)吸收達(dá)到了峰值，但在近紅外區(qū)域卻沒有吸收。另外，葉綠素含量測(cè)定儀還具有反應(yīng)氮元素含量的作用。
      玉米葉綠素含量的測(cè)定有兩種方法。葉綠素含量測(cè)定儀法：利用日本產(chǎn)的SPAD-502葉綠素含量測(cè)定儀于花期對(duì)玉米功能葉片中部進(jìn)行活體測(cè)定。每個(gè)材料取3個(gè)葉片，最后求平均值。分光光度計(jì)法：將葉綠素含量測(cè)定儀法測(cè)定完的葉片取回進(jìn)行分光光度計(jì)法測(cè)定。用毛刷刷去表面雜質(zhì)，用水沖洗，擦干，備用。每個(gè)葉片在中部用直徑9 mm打孔器打孔，取6個(gè)圓形葉片，稱重后放于15 mL試管，用10 mL95%乙醇避光浸泡96 h，浸泡過程中每天混勻2次，葉片完全變白后進(jìn)行比色，于665、649、470 nm波長(zhǎng)測(cè)量光密度值，計(jì)算葉綠素含量，取3個(gè)葉片的平均值作為該材料的含量值。計(jì)算公式為：CA=13.95D665-6.88D649；CB=24.96D649-7.32D665；C其它=(1000D470-2.05CA-114.8CB)/245。