粗脂肪酶活力的測定方法的研究

來源：本站　類別：技術文章　更新時間：2010-06-19　閱讀次

脂肪酶又稱甘油酯水解酶, 它能催化甘油三酯水解生成甘油二酯或甘油一酯或甘油和脂肪酸。粗脂肪酶由于保存不當或放置時間較長, 常常會使活力下降, 因此, 使用時必須對粗脂肪酶活力進行測定。檢測脂肪酶活力的方法有很多種, 所使用的底物也很多, 各有優缺點。目前為止, 還沒有一種統一的檢測手段, 各生產廠家和科研部門通常根據自己的實驗條件來制定各自的檢測方法。反映脂肪分解程度的指標有酸價、碘價、皂化價、過氧化值等。本實驗用酸價作指標, 用95%乙醇作終止劑, 通過酸價的測定反映脂肪酶分解脂肪的程度, 從而求得酶活力。旨在探討一種新的快速的測定粗脂肪酶活力的一種方法。

1　材料與方法

1.1　實驗材料

1.1.1　食用色拉油: 市售

1.1.2　生物試劑

粗脂肪酶，標準脂肪酶；

1.1.3　化學試劑

酚酞指示劑95%乙醇溶液0105 mol/LNaOH溶液

1.1.4　主要儀器設備

電熱恒溫水浴鍋　微量滴定管　電子天平 SZF-06A粗脂肪測定儀纖維測定儀

1.2　方　　法

1.2.1　粗酶液的制備

用電子天平分別稱取粗脂肪酶0.010 g、0.020 g 和0.030 g, 用蒸餾水溶解并定容至100 mL, 配成濃度分別為0.01%、0.02% 和0.03%的粗酶液。

1.2.2　實驗設計

本實驗以10 mL色拉油為底物,以酶用量、水解溫度、反應時間為因素,通過酸價的測定選定其水解的最佳條件。正交實驗設計見表1和表2。

1.2.3　酸價的測定

酸價是指中和1 mol游離脂肪酸所需NaOH的毫克數, 它用于衡量油脂的水解程度。實驗中用酸堿滴定法測定水解液的酸價, 參照文獻中所使用的方法, 向所得的水解液滴加1 mL 95%的乙醇溶液, 搖勻, 終止反應, 并加入2滴酚酞指示劑, 迅速用0105 mol/L的NaOH溶液滴定至溶液呈微紅色, 在30 s內不消失為終點, 記錄消耗的NaOH溶液毫升數(V ) 。用同樣的方法測定空白值, 每個試驗重復兩次, 以平均值作為測定結果。

酸價按下式計算:

X = C (V - V0 ) ×40 /M

式中: X —油脂酸價(mgNaOH /g油)

C—NaOH標準溶液的濃度(mol/L)

M —試樣的質量( g)

40—NaOH的mmol質量(mg/mmol)

1.2.4　粗脂肪酶活力的測定

在最佳水解條件下, 分別測得粗脂肪酶和標準脂肪酶水解液的酸價X1、X2 , 根據公式U1 /U= X1 / X2求得粗脂肪酶的活力, 其中U1為粗脂肪酶活力, U為標準脂肪酶活力。

1. 2. 5　標準脂肪酶液的配制

根據實驗最佳條件, 配制標準脂肪酶液。

2　結果與分析

2.1　最佳水解條件的選定